分光光度計物質(zhì)在光的照射激發(fā)下，產(chǎn)生了對光吸收的效應，物質(zhì)對光的吸收是具有選擇性的，各種不同的物質(zhì)都是具有其各自的吸收光譜，因此當某單色光通過溶液時，其能量就會被吸收而減弱，光能量減弱的程度和物質(zhì)的濃度有一定的比例關系，也即符合于比色原理比耳定律。
1.入射光波長的選擇
應根據(jù)吸收光譜曲線，選擇溶液具有最大吸收時的波長作為入射光的波長。
如顯色劑與鈷絡合物在420nm波長處均有最大吸收峰。如用此波長測定鈷，則未反應的顯色劑會造成干擾而降低測定的準確度。
2.參比溶液的選擇
1）如果顯色劑或其他試劑略有吸收，應用空白溶液（不加試樣的溶液）作參比溶液。
2）如果僅待測物與顯色劑的反應產(chǎn)物有吸收，可用純?nèi)軇┳鲄⒈热芤骸?
3）如試樣中其他組分有吸收，但不與顯色劑反應，則當顯色劑無吸收時，可用試樣溶液作參比溶液，當顯色劑略有吸收時，可在試液中加入適當掩蔽劑將待測組分掩蔽后再加顯色劑，以此溶液作參比溶液。
3.吸光度讀數(shù)范圍的選擇
實踐證明，吸光度在0.2-0.5內(nèi)時，測量的相對誤差最小。
可用兩種方法來調(diào)整被測溶液的吸光度：
1）控制被測溶液的濃度。如改變?nèi)恿浚淖內(nèi)芤旱臐饪s倍數(shù)或稀釋倍數(shù)。
2）選擇不同的比色皿。吸光度小的溶液要用光程長的比色皿，吸光度大的溶液要用光程短的比色皿。
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